Gelişmiş Hücre Döngüsü Analizi
Hücre döngüsünü izlemek için Akış sitometrisi kullanmak, hücre popülasyonlarının özniteliklerini incelemek için hızlı bir yöntemdir. En yaygın olarak uygulanan yöntemler, floresan DNA bağlayıcı boyalarla boyamayı takiben hücresel DNA içeriğinin tek değişkenli analizine dayanır. Bu boyalar arasında, Propidyum İyodür ve DAPI, DNA'ya kantitatif olarak bağlanma becerileri nedeniyle yaygın olarak kullanılır; bu nedenle floresan yoğunluğunun ölçümü, DNA içeriğiyle birbirinden farklılık gösteren G0/G1, S ve G2/M olmak üzere 3 ana hücre döngüsü fazının çözünürlüğünü sağlar. G2 ve M Faz hücreleri aynı DNA içeriğine sahip olduğundan, tek değişkenli yaklaşım ayrılmalarına izin vermez. Bu tür analiz için, daha bilgilendirici bir yaklaşım hem DNA içeriğinin ölçülmesini hem de floresan etiketli antikorlar kullanılarak hücre döngüsünün çeşitli fazlarıyla ilişkili proteinlerin ekspresyonunu kullanan iki değişkenli bir işlemden oluşur. Diğerlerinin yanı sıra, döngü boyunca süreksiz bir ekspresyon zamanlamasına sahip olan Siklinler ve mitoz ve G2 arasında diferansiyel olarak fosforilasyona uğramış Histon H3, hücre döngüsünün çeşitli fazlarını daha granüler bir şekilde tanımlamak için uygun hedefler oluşturur. DNA ve protein ölçümlerinin kombinasyonu, hücreleri G2 ve farklı M Fazlarına ayırma aracı sağlar.
Jurkat Hücre Dizisinin Çok Değişkenli Analizini Kullanan gelişmiş hücre döngüsü.İşlem görmemiş Jurkat hücreleri Anti-Fosfo-histon H3-Alexa647, Siklin A2-FITC ve hücre döngüsü kiti ile boyanmıştır. (A) DNA boyamasına göre gösterilen G1, S, G2 (B) DNA boyama ve pH3 boyama kullanılarak iki değişkenli analiz G1, S, G2 ve M Fazları arasındaki ayrımı gösterir (C) pH3 ve Siklin A2 ekspresyonunun ikili analizi, M Fazındaki hücreleri ayırt etme yolları sağlar. (D) Grafik, Şekil B'de yer alan Geçit III ve IV'deki hücreleri içeren Boolean geçidi kullanılarak tanımlanan G2/M üzerinde geçitlenir. pH3 ile Siklin A2, hücrelerin G2, Profaz, Metafaz/Anafaz ve Geç Mitoza ayrılmasını sağlar.
